V predchádzajúcom projekte testovania lokálnych závodov na spracovanie potravín na komáre v Thajsku sa zistilo, že esenciálne oleje (EO) z Cyperus rotundus, galangalu a škorice majú dobrú účinnosť proti komárom Aedes aegypti. V snahe znížiť používanie tradičnýchinsekticídya zlepšiť kontrolu populácií rezistentných komárov, cieľom tejto štúdie bolo identifikovať potenciálny synergizmus medzi adulticídnymi účinkami etylénoxidu a toxicitou permetrínu na komáre rodu Aedes aegypti, vrátane kmeňov rezistentných a citlivých na pyretroidy.
Vyhodnotiť chemické zloženie a účinnosť EO extrahovaného z odnoží C. rotundus a A. galanga a kôry C. verum proti citlivému kmeňu Muang Chiang Mai (MCM-S) a rezistentnému kmeňu Pang Mai Dang (PMD-R). ) Dospelý Ae. Aedes aegypti je aktívny. Na týchto komároch Aedes sa tiež vykonal biologický test zmesi EO a permetrínu na dospelých, aby sa pochopila jej synergická aktivita. kmene aegypti.
Chemická charakterizácia pomocou analytickej metódy GC-MS ukázala, že z esenciálnych olejov (EO) C. rotundus, A. galanga a C. verum bolo identifikovaných 48 zlúčenín, ktoré predstavujú 80,22 %, 86,75 % a 97,24 % z celkových zložiek. Cyperén (14,04 %), β-bisabolén (18,27 %) a cinnamaldehyd (64,66 %) sú hlavnými zložkami cyperusového oleja, galangalového oleja a balzamikového oleja. V biologických testoch usmrcovania dospelých jedincov boli EV C. rotundus, A. galanga a C. verum účinné pri usmrcovaní Ae. aegypti, hodnoty LD50 MCM-S a PMD-R boli 10,05 a 9,57 μg/mg u samíc, 7,97 a 7,94 μg/mg u samíc a 3,30 a 3,22 μg/mg u samíc. Účinnosť MCM-S a PMD-R Ae pri usmrcovaní dospelých jedincov komára rodu Aegypti v týchto EO bola blízka piperonylbutoxidu (hodnoty PBO, LD50 = 6,30 a 4,79 μg/mg u samíc), ale nie tak výrazná ako u permetrínu (hodnoty LD50 = 0,44 a 3,70 ng/mg u samíc). Kombinované biologické testy však zistili synergiu medzi EO a permetrínom. Významný synergizmus s permetrínom proti dvom kmeňom komárov rodu Aedes. Aedes aegypti bol zaznamenaný v EM komárov C. rotundus a A. galanga. Pridanie olejov z C. rotundus a A. galanga významne znížilo hodnoty LD50 permetrínu na MCM-S z 0,44 na 0,07 ng/mg a 0,11 ng/mg u samíc, s hodnotami synergického pomeru (SR) 6,28 a 4,00. Okrem toho, esenciálne oleje z C. rotundus a A. galanga tiež významne znížili hodnoty LD50 permetrínu na PMD-R z 3,70 na 0,42 ng/mg a 0,003 ng/mg u samíc, s hodnotami SR 8,81 a 1233,33.
Synergický účinok kombinácie EO a permetrínu na zvýšenie toxicity pre dospelých jedincov proti dvom kmeňom komárov rodu Aedes. Aedes aegypti preukazuje sľubnú úlohu etylénoxidu ako synergistu pri zvyšovaní účinnosti proti komárom, najmä tam, kde sú tradičné zlúčeniny neúčinné alebo nevhodné.
Komár Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) je hlavným prenášačom horúčky dengue a iných infekčných vírusových ochorení, ako je žltá zimnica, chikungunya a vírus Zika, a predstavuje obrovskú a pretrvávajúcu hrozbu pre ľudí [1, 2]. Vírus dengue je najzávažnejšou patogénnou hemoragickou horúčkou postihujúcou ľudí, pričom sa odhaduje, že ročne sa vyskytne 5 – 100 miliónov prípadov a viac ako 2,5 miliardy ľudí na celom svete je ohrozených [3]. Ohniská tohto infekčného ochorenia predstavujú obrovskú záťaž pre obyvateľstvo, zdravotnícke systémy a ekonomiky väčšiny tropických krajín [1]. Podľa thajského ministerstva zdravotníctva bolo v roku 2015 v celej krajine hlásených 142 925 prípadov horúčky dengue a 141 úmrtí, čo je viac ako trojnásobok počtu prípadov a úmrtí v roku 2014 [4]. Napriek historickým dôkazom bola horúčka dengue eradikovaná alebo výrazne znížená komárom Aedes. Po kontrole Aedes aegypti [5] sa miera infekcie dramaticky zvýšila a choroba sa rozšírila po celom svete, čiastočne v dôsledku desaťročí globálneho otepľovania. Eliminácia a kontrola Ae. Aedes aegypti je pomerne náročná, pretože ide o domáceho komára prenášača, ktorý sa počas dňa pári, kŕmi, odpočíva a kladie vajíčka v ľudských obydliach a ich okolí. Okrem toho sa tento komár dokáže prispôsobiť zmenám prostredia alebo narušeniam spôsobeným prírodnými udalosťami (ako je sucho) alebo ľudskými kontrolnými opatreniami a môže sa vrátiť k pôvodnému počtu [6, 7]. Keďže vakcíny proti horúčke dengue boli schválené len nedávno a neexistuje žiadna špecifická liečba horúčky dengue, prevencia a znižovanie rizika prenosu dengue závisí výlučne od kontroly komárov prenášačov a eliminácie kontaktu ľudí s nimi.
Najmä používanie chemikálií na kontrolu komárov v súčasnosti zohráva dôležitú úlohu vo verejnom zdraví ako dôležitá súčasť komplexnej integrovanej ochrany proti prenášačom. Medzi najobľúbenejšie chemické metódy patrí používanie nízkotoxických insekticídov, ktoré pôsobia proti larvám komárov (larvicídy) a dospelým komárom (adidocídy). Kontrola lariev prostredníctvom redukcie zdrojov a pravidelného používania chemických larvicídov, ako sú organofosfáty a regulátory rastu hmyzu, sa považuje za dôležitú. Nepriaznivé environmentálne vplyvy spojené so syntetickými pesticídmi a ich prácna a zložitá údržba však zostávajú hlavným problémom [8, 9]. Tradičná aktívna kontrola prenášačov, ako je kontrola dospelých jedincov, zostáva najúčinnejším prostriedkom kontroly počas vírusových epidémií, pretože dokáže rýchlo a vo veľkom meradle eradikovať prenášače infekčných chorôb, ako aj skrátiť životnosť a dlhovekosť lokálnych populácií prenášačov [3]. , 10]. Štyri triedy chemických insekticídov: organochlórové kyseliny (označované len ako DDT), organofosfáty, karbamáty a pyretroidy tvoria základ programov kontroly prenášačov, pričom pyretroidy sa považujú za najúspešnejšiu triedu. Sú vysoko účinné proti rôznym článkonožcom a majú nízku účinnosť. V súčasnosti tvoria syntetické pyretroidy väčšinu komerčných pesticídov, čo predstavuje približne 25 % svetového trhu s pesticídmi [11, 12]. Permetrín a deltametrín sú širokospektrálne pyretroidné insekticídy, ktoré sa už desaťročia používajú na celom svete na kontrolu rôznych škodcov poľnohospodárskeho a lekárskeho významu [13, 14]. V 50. rokoch 20. storočia bol DDT vybraný ako chemikália pre národný program kontroly komárov v Thajsku. Po rozšírenom používaní DDT v oblastiach s endemickým výskytom malárie Thajsko postupne v rokoch 1995 až 2000 ukončilo používanie DDT a nahradilo ho dvoma pyretroidmi: permetrínom a deltametrínom [15, 16]. Tieto pyretroidné insekticídy boli zavedené začiatkom 90. rokov 20. storočia na kontrolu malárie a horúčky dengue, predovšetkým prostredníctvom ošetrenia sieťkami na posteľ a používania tepelných hmiel a sprejov s ultranízkou toxicitou [14, 17]. Stratili však účinnosť kvôli silnej odolnosti komárov a nedostatočnému dodržiavaniu predpisov zo strany verejnosti z dôvodu obáv o verejné zdravie a vplyv syntetických chemikálií na životné prostredie. To predstavuje značné výzvy pre úspech programov kontroly vektorov hrozieb [14, 18, 19]. Aby bola stratégia účinnejšia, sú potrebné včasné a vhodné protiopatrenia. Odporúčané postupy riadenia zahŕňajú nahrádzanie prírodných látok, rotáciu chemikálií rôznych tried, pridávanie synergistov a miešanie chemikálií alebo súčasnú aplikáciu chemikálií rôznych tried [14, 20, 21]. Preto je naliehavo potrebné nájsť a vyvinúť ekologickú, pohodlnú a účinnú alternatívu a synergistu a cieľom tejto štúdie je túto potrebu riešiť.
Insekticídy prírodného pôvodu, najmä tie, ktoré sú založené na rastlinných zložkách, preukázali potenciál pri hodnotení súčasných a budúcich alternatív kontroly komárov [22, 23, 24]. Niekoľko štúdií ukázalo, že je možné kontrolovať dôležité prenášače komárov pomocou rastlinných produktov, najmä esenciálnych olejov (EO), ako prostriedkov na ničenie dospelých komárov. Adulcídne vlastnosti proti niektorým dôležitým druhom komárov sa zistili v mnohých rastlinných olejoch, ako je zeler, rasca, zedoária, aníz, paprika, tymian, Schinus terebinthifolia, Cymbopogon citratus, Cymbopogon schoenanthus, Cymbopogon giganteus, Chenopodium ambrosioides, Cochlospermum planchonii, Eucalyptus ter eticornis, Eucalyptus citriodora, Cananga odorata a Petroselinum Criscum [25, 26, 27, 28, 29, 30]. Etylénoxid sa v súčasnosti používa nielen samostatne, ale aj v kombinácii s extrahovanými rastlinnými látkami alebo existujúcimi syntetickými pesticídmi, čo spôsobuje rôzne stupne toxicity. Kombinácie tradičných insekticídov, ako sú organofosfáty, karbamáty a pyretroidy, s etylénoxidom/rastlinnými extraktmi pôsobia synergicky alebo antagonisticky vo svojich toxických účinkoch a preukázalo sa, že sú účinné proti prenášačom chorôb a škodcom [31, 32, 33, 34, 35]. Väčšina štúdií o synergických toxických účinkoch kombinácií fytochemikálií so syntetickými chemikáliami alebo bez nich sa však vykonala na poľnohospodárskych hmyzích prenášačoch a škodcoch, a nie na medicínsky dôležitých komároch. Navyše, väčšina prác o synergických účinkoch kombinácií rastlinných a syntetických insekticídov proti prenášačom komárov sa zamerala na larvicídny účinok.
V predchádzajúcej štúdii, ktorú autori uskutočnili ako súčasť prebiehajúceho výskumného projektu zameraného na skríning inticídov z pôvodných potravinárskych rastlín v Thajsku, sa zistilo, že etylénoxidy z Cyperus rotundus, galangalu a škorice majú potenciálnu aktivitu proti dospelým komárom rodu Aedes. Egypt [36]. Preto sa táto štúdia zamerala na vyhodnotenie účinnosti éterických olejov izolovaných z týchto liečivých rastlín proti komárom rodu Aedes. aegypti, vrátane kmeňov rezistentných a citlivých na pyretroidy. Analyzoval sa aj synergický účinok binárnych zmesí etylénoxidu a syntetických pyretroidov s dobrou účinnosťou u dospelých komárov s cieľom znížiť používanie tradičných insekticídov a zvýšiť odolnosť voči prenášačom komárov, najmä proti Aedes. Aedes aegypti. Tento článok uvádza chemickú charakterizáciu účinných esenciálnych olejov a ich potenciál zvýšiť toxicitu syntetického permetrínu proti komárom rodu Aedes. aegypti v kmeňoch citlivých na pyretroidy (MCM-S) a rezistentných kmeňoch (PMD-R).
Odnože druhov C. rotundus a A. galanga a kôra C. verum (obr. 1) použité na extrakciu esenciálneho oleja boli zakúpené od dodávateľov bylinných liečiv v provincii Chiang Mai v Thajsku. Vedecká identifikácia týchto rastlín sa dosiahla prostredníctvom konzultácie s pánom Jamesom Franklinom Maxwellom, herbárskym botanikom, Katedra biológie, Vysoká škola prírodných vied, Univerzita Chiang Mai (CMU), provincia Chiang Mai, Thajsko, a vedkyňou Wannari Charoensap; na Katedre farmácie, Farmaceutickej fakulty, Univerzita Carnegie Mellon, pani Voucher, sú vzorky každej rastliny uložené na Katedre parazitológie na Lekárskej fakulte Univerzity Carnegie Mellon pre budúce použitie.
Vzorky rastlín sa sušili jednotlivo v tieni 3 – 5 dní v otvorenom priestore s aktívnym vetraním a okolitou teplotou približne 30 ± 5 °C, aby sa odstránila vlhkosť pred extrakciou prírodných esenciálnych olejov (EO). Celkovo 250 g každého suchého rastlinného materiálu sa mechanicky rozomlelo na hrubý prášok a použilo sa na izoláciu esenciálnych olejov (EO) parnou destiláciou. Destilačný prístroj pozostával z elektrického vykurovacieho plášťa, 3000 ml banky s okrúhlym dnom, extrakčnej kolóny, kondenzátora a zariadenia Cool ace (Eyela Cool Ace CA-1112 CE, Tokyo Rikakikai Co. Ltd., Tokio, Japonsko). Do banky sa pridalo 1600 ml destilovanej vody a 10 – 15 sklenených guľôčok a potom sa banka zahrievala na približne 100 °C pomocou elektrického ohrievača najmenej 3 hodiny, kým sa destilácia nedokončila a prestal sa produkovať EO. Vrstva EO sa oddelila od vodnej fázy pomocou deliaceho lievika, vysušila sa nad bezvodým síranom sodným (Na2SO4) a uskladnila sa v uzavretej hnedej fľaši pri teplote 4 °C, kým sa neskúmalo chemické zloženie a aktivita dospelých jedincov.
Chemické zloženie esenciálnych olejov sa stanovovalo súčasne s biologickým testom na dospelú substanciu. Kvalitatívna analýza sa vykonala pomocou systému GC-MS pozostávajúceho z plynového chromatografu Hewlett-Packard (Wilmington, CA, USA) 7890A vybaveného jedným kvadrupólovým hmotnostným selektívnym detektorom (Agilent Technologies, Wilmington, CA, USA) a MSD 5975C (EI) (Agilent Technologies).
Chromatografická kolóna – DB-5MS (30 m × vnútorný priemer 0,25 mm × hrúbka filmu 0,25 µm). Celkový čas priebehu GC-MS bol 20 minút. Podmienky analýzy boli: teplota injektora a prenosovej linky bola 250 °C a 280 °C; teplota pece sa nastavila tak, aby sa zvyšovala z 50 °C na 250 °C rýchlosťou 10 °C/min, nosným plynom bolo hélium; prietok 1,0 ml/min; objem injektovanej látky bol 0,2 µl (1/10 % objemu v CH2Cl2, deliaci pomer 100:1); Na detekciu GC-MS sa použil elektrónový ionizačný systém s ionizačnou energiou 70 eV. Rozsah akvizície je 50 – 550 atómových hmotnostných jednotiek (amu) a rýchlosť skenovania je 2,91 skenov za sekundu. Relatívne percentá zložiek sú vyjadrené ako percentá normalizované podľa plochy píku. Identifikácia zložiek EO je založená na ich retenčnom indexe (RI). RI bol vypočítaný pomocou rovnice Van den Doola a Kratza [37] pre sériu n-alkánov (C8-C40) a porovnaný s retenčnými indexmi z literatúry [38] a knižničných databáz (NIST 2008 a Wiley 8NO8). Identita zobrazených zlúčenín, ako je štruktúra a molekulový vzorec, bola potvrdená porovnaním s dostupnými autentickými vzorkami.
Analytické štandardy pre syntetický permetrín a piperonylbutoxid (PBO, pozitívna kontrola v synergických štúdiách) boli zakúpené od spoločnosti Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Testovacie súpravy Svetovej zdravotníckej organizácie (WHO) pre dospelých a diagnostické dávky papiera impregnovaného permetrínom (0,75 %) boli komerčne zakúpené od Centra kontroly vektorov WHO v Penangu v Malajzii. Všetky ostatné použité chemikálie a činidlá boli analytickej kvality a boli zakúpené od miestnych inštitúcií v provincii Chiang Mai v Thajsku.
Komáre použité ako testovacie organizmy v biotestu dospelých jedincov boli voľne sa páriace laboratórne komáre Aedes. aegypti, vrátane citlivého kmeňa Muang Chiang Mai (MCM-S) a rezistentného kmeňa Pang Mai Dang (PMD-R). Kmeň MCM-S bol získaný z lokálnych vzoriek odobratých v oblasti Muang Chiang Mai v provincii Chiang Mai v Thajsku a od roku 1995 sa uchováva v entomologickej miestnosti Katedry parazitológie Lekárskej fakulty CMU [39]. Kmeň PMD-R, u ktorého sa zistilo, že je rezistentný na permetrín, bol izolovaný z poľných komárov pôvodne odobratých z Ban Pang Mai Dang v okrese Mae Tang v provincii Chiang Mai v Thajsku a od roku 1997 sa uchováva v tom istom ústave [40]. Kmene PMD-R boli pestované pod selektívnym tlakom, aby sa udržali úrovne rezistencie prerušovaným vystavením 0,75 % permetrínu pomocou detekčnej súpravy WHO s niekoľkými úpravami [41]. Každý kmeň Ae. Kmeň Aedes aegypti bol kolonizovaný jednotlivo v laboratóriu bez patogénov pri teplote 25 ± 2 °C, relatívnej vlhkosti 80 ± 10 % a fotoperióde 14:10 hodín svetlo/tma. Približne 200 lariev bolo chovaných v plastových miskách (33 cm dlhých, 28 cm širokých a 9 cm vysokých) naplnených vodou z vodovodu v hustote 150 – 200 lariev na misku a dvakrát denne kŕmených sterilizovanými psími sušienkami. Dospelé červy boli chované vo vlhkých klietkach a kontinuálne kŕmené 10 % vodným roztokom sacharózy a 10 % roztokom multivitamínového sirupu. Samice komárov pravidelne cicajú krv na kladenie vajíčok. Samice vo veku dva až päť dní, ktoré neboli kŕmené krvou, sa môžu kontinuálne používať v experimentálnych biologických testoch na dospelých jedincoch.
Biologický test závislosti odpovede od dávky a mortality EO sa vykonal na dospelých samiciach komárov Aedes aegypti, MCM-S a PMD-R s použitím lokálnej metódy upravenej podľa štandardného protokolu WHO pre testovanie citlivosti [42]. EO z každej rastliny sa sériovo riedil vhodným rozpúšťadlom (napr. etanolom alebo acetónom), aby sa získala odstupňovaná séria 4-6 koncentrácií. Po anestézii oxidom uhličitým (CO2) sa komáre jednotlivo odvážili. Anestetizované komáre sa potom udržiavali nehybne na suchom filtračnom papieri na vlastnej studenej platni pod stereomikroskopom, aby sa zabránilo ich reaktivácii počas procedúry. Pri každom ošetrení sa na hornú pronotum samičky aplikovalo 0,1 μl roztoku EO pomocou ručného mikrodávkovača Hamilton (700 Series Microliter™, Hamilton Company, Reno, NV, USA). Dvadsaťpäť samíc bolo ošetrených každou koncentráciou, pričom mortalita sa pohybovala od 10 % do 95 % pre najmenej 4 rôzne koncentrácie. Komáre ošetrené rozpúšťadlom slúžili ako kontrola. Aby sa predišlo kontaminácii testovaných vzoriek, vymeňte filtračný papier za nový pre každý testovaný EO. Dávky použité v týchto biologických testoch sú vyjadrené v mikrogramoch EO na miligram telesnej hmotnosti živej samičky. Aktivita dospelých PBO bola tiež hodnotená podobným spôsobom ako EO, pričom PBO bola použitá ako pozitívna kontrola v synergických experimentoch. Ošetrené komáre vo všetkých skupinách boli umiestnené do plastových pohárov a bolo im podaných 10 % sacharózy plus 10 % multivitamínového sirupu. Všetky biologické testy boli vykonané pri teplote 25 ± 2 °C a relatívnej vlhkosti 80 ± 10 % a štyrikrát opakované s kontrolami. Úmrtnosť počas 24-hodinového obdobia odchovu bola skontrolovaná a potvrdená absenciou reakcie komára na mechanickú stimuláciu a potom zaznamenaná na základe priemeru zo štyroch opakovaní. Experimentálne ošetrenia boli opakované štyrikrát pre každú testovanú vzorku s použitím rôznych šarží komárov. Výsledky boli zhrnuté a použité na výpočet percentuálnej úmrtnosti, ktorá bola použitá na stanovenie 24-hodinovej letálnej dávky probitovou analýzou.
Synergický anticídny účinok EO a permetrínu bol hodnotený pomocou postupu lokálnej toxicity [42], ako bolo opísané predtým. Na prípravu permetrínu v požadovanej koncentrácii sa použil acetón alebo etanol ako rozpúšťadlo, ako aj binárna zmes EO a permetrínu (EO-permetrín: permetrín zmiešaný s EO v koncentrácii LD25). Testovacie súpravy (permetrín a EO-permetrín) boli hodnotené proti kmeňom MCM-S a PMD-R Ae. Aedes aegypti. Každej z 25 samičiek komárov boli podané štyri dávky permetrínu na otestovanie jeho účinnosti pri usmrcovaní dospelých jedincov, pričom každé ošetrenie sa opakovalo štyrikrát. Na identifikáciu kandidátskych synergistov EO sa každej z 25 samičiek komárov podalo 4 až 6 dávok EO-permetrínu, pričom každá aplikácia sa opakovala štyrikrát. Ošetrenie PBO-permetrínom (permetrín zmiešaný s koncentráciou PBO LD25) slúžilo aj ako pozitívna kontrola. Dávky použité v týchto biologických testoch sú vyjadrené v nanogramoch testovanej vzorky na miligram telesnej hmotnosti živej samičky. Pre každý kmeň komárov sa vykonali štyri experimentálne hodnotenia na jednotlivo chovaných skupinách a údaje o úmrtnosti sa zhromaždili a analyzovali pomocou Probitu na stanovenie 24-hodinovej smrteľnej dávky.
Miera úmrtnosti bola upravená pomocou Abbottovho vzorca [43]. Upravené údaje boli analyzované Probitovou regresnou analýzou s použitím počítačového štatistického programu SPSS (verzia 19.0). Letálne hodnoty 25 %, 50 %, 90 %, 95 % a 99 % (LD25, LD50, LD90, LD95 a LD99) boli vypočítané s použitím zodpovedajúcich 95 % intervalov spoľahlivosti (95 % CI). Merania významnosti a rozdiely medzi testovanými vzorkami boli hodnotené pomocou chí-kvadrát testu alebo Mann-Whitneyho U testu v rámci každého biologického testu. Výsledky boli považované za štatisticky významné pri P< 0,05. Koeficient odporu (RR) sa odhaduje na úrovni LD50 pomocou nasledujúceho vzorca [12]:
RR > 1 označuje rezistenciu a RR ≤ 1 označuje citlivosť. Hodnota synergického pomeru (SR) každého kandidáta na synergický účinok sa vypočíta takto [34, 35, 44]:
Tento faktor rozdeľuje výsledky do troch kategórií: hodnota SR 1 ± 0,05 sa považuje za hodnotu bez zjavného účinku, hodnota SR > 1,05 sa považuje za hodnotu so synergickým účinkom a hodnota SR. Svetložltý kvapalný olej možno získať parnou destiláciou odnoží C. rotundus a A. galanga a kôry C. verum. Výťažky vypočítané na suchú hmotnosť boli 0,15 %, 0,27 % (hmotn./hmotn.) a 0,54 % (obj./obj.) (Tabuľka 1). GC-MS štúdia chemického zloženia olejov z C. rotundus, A. galanga a C. verum ukázala prítomnosť 19, 17 a 21 zlúčenín, ktoré predstavovali 80,22 %, 86,75 % a 97,24 % všetkých zložiek (Tabuľka 2). Zlúčeniny oleja z odnoží C. lucidum pozostávajú prevažne z cyperonénu (14,04 %), nasledovaného karalénom (9,57 %), α-kapselánom (7,97 %) a α-kapselánom (7,53 %). Hlavnou chemickou zložkou oleja z odnoží galangalu je β-bisabolén (18,27 %), nasledovaný α-bergamoténom (16,28 %), 1,8-cineolom (10,17 %) a piperonolom (10,09 %). Zatiaľ čo cinnamaldehyd (64,66 %) bol identifikovaný ako hlavná zložka oleja z kôry C. verum, octan škoricový (6,61 %), α-kopaén (5,83 %) a 3-fenylpropionaldehyd (4,09 %) boli považované za vedľajšie zložky. Chemické štruktúry cypernénu, β-bisabolénu a cinnamaldehydu sú hlavnými zlúčeninami C. rotundus, A. galanga a C. verum, ako je znázornené na obrázku 2.
Výsledky troch OO hodnotiacich aktivitu dospelých jedincov proti komárom Aedes. komáre Aedys aegypti sú uvedené v tabuľke 3. Zistilo sa, že všetky EO majú letálne účinky na komáre Aedes MCM-S pri rôznych typoch a dávkach. Aedys aegypti. Najúčinnejším EO je C. verum, nasledovaný A. galanga a C. rotundus s hodnotami LD50 3,30, 7,97 a 10,05 μg/mg u samíc MCM-S, čo je mierne viac ako 3,22 (U = 1), Z = -0,775, P = 0,667), 7,94 (U = 2, Z = 0, P = 1) a 9,57 (U = 0, Z = -1,549, P = 0,333) μg/mg PMD-R u žien. To zodpovedá tomu, že PBO má mierne vyšší účinok na dospelých jedincov na PMD-R ako kmeň MSM-S s hodnotami LD50 4,79 a 6,30 μg/mg u samíc (U = 0, Z = -2,021, P = 0,057). Dá sa vypočítať, že hodnoty LD50 C. verum, A. galanga, C. rotundus a PBO proti PMD-R sú približne 0,98, 0,99, 0,95 a 0,76-krát nižšie ako hodnoty proti MCM-S. To naznačuje, že citlivosť na PBO a EO je medzi oboma kmeňmi Aedes relatívne podobná. Hoci PMD-R bol citlivejší ako MCM-S, citlivosť Aedes aegypti nebola významná. Naproti tomu sa dva kmene Aedes výrazne líšili v citlivosti na permetrín aegypti (Tabuľka 4). PMD-R preukázal významnú rezistenciu voči permetrínu (hodnota LD50 = 0,44 ng/mg u žien) s vyššou hodnotou LD50 3,70 v porovnaní s MCM-S (hodnota LD50 = 0,44 ng/mg u žien) ng/mg u žien (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). Hoci je PMD-R oveľa menej citlivý na permetrín ako MCM-S, jeho citlivosť na PBO a oleje z C. verum, A. galanga a C. rotundus je o niečo vyššia ako u MCM-S.
Ako sa pozorovalo v biotestu kombinácie EO a permetrínu na dospelej populácii, binárne zmesi permetrínu a EO (LD25) vykazovali buď synergiu (hodnota SR > 1,05), alebo žiadny účinok (hodnota SR = 1 ± 0,05). Komplexné účinky zmesi EO a permetrínu na dospelé jedince experimentálnych albínskych komárov. Kmene Aedes aegypti MCM-S a PMD-R sú uvedené v tabuľke 4 a na obrázku 3. Zistilo sa, že pridanie oleja z C. verum mierne znižuje LD50 permetrínu proti MCM-S a mierne zvyšuje LD50 proti PMD-R na 0,44 – 0,42 ng/mg u žien a z 3,70 na 3,85 ng/mg u žien. Naopak, pridanie olejov z C. rotundus a A. galanga významne znížilo LD50 permetrínu na MCM-S z 0,44 na 0,07 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) a na 0,11 (U = 0, Z) = -2,309, P = 0,029) ng/mg u žien. Na základe hodnôt LD50 MCM-S boli hodnoty SR zmesi EO-permetrínu po pridaní olejov z C. rotundus a A. galanga 6,28 a 4,00. V súlade s tým sa LD50 permetrínu proti PMD-R významne znížila z 3,70 na 0,42 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) a na 0,003 po pridaní olejov z C. rotundus a A. galanga (U = 0). , Z = -2,337, P = 0,029) ng/mg samice. Hodnota SR permetrínu v kombinácii s C. rotundus proti PMD-R bola 8,81, zatiaľ čo hodnota SR zmesi galangalu a permetrínu bola 1233,33. V porovnaní s MCM-S sa hodnota LD50 pozitívnej kontroly PBO znížila z 0,44 na 0,26 ng/mg (samice) a z 3,70 ng/mg (samice) na 0,65 ng/mg (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) a PMD-R (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). Hodnoty SR zmesi PBO a permetrínu pre kmene MCM-S a PMD-R boli 1,69 a 5,69. Tieto výsledky naznačujú, že oleje z C. rotundus a A. galanga a PBO zvyšujú toxicitu permetrínu vo väčšej miere ako olej z C. verum pre kmene MCM-S a PMD-R.
Aktivita EO, PBO, permetrínu (PE) v dospelosti (LD50) proti kmeňom komárov Aedes citlivým na pyretroid (MCM-S) a rezistentným (PMD-R) kmeňom komárov Aedes. Aedes aegypti
[45]. Syntetické pyretroidy sa používajú na celom svete na kontrolu takmer všetkých článkonožcov s poľnohospodárskym a medicínskym významom. Avšak vzhľadom na škodlivé dôsledky používania syntetických insekticídov, najmä pokiaľ ide o vývoj a rozsiahlu rezistenciu komárov, ako aj vplyv na dlhodobé zdravie a životné prostredie, je teraz naliehavo potrebné znížiť používanie tradičných syntetických insekticídov a vyvinúť alternatívy [35, 46, 47]. Okrem ochrany životného prostredia a ľudského zdravia patria medzi výhody botanických insekticídov vysoká selektivita, globálna dostupnosť a jednoduchá výroba a použitie, vďaka čomu sú atraktívnejšie na kontrolu komárov [32, 48, 49]. Táto štúdia okrem objasnenia chemických vlastností účinných esenciálnych olejov prostredníctvom GC-MS analýzy tiež hodnotila účinnosť dospelých esenciálnych olejov a ich schopnosť zvýšiť toxicitu syntetického permetrínu aegypti v kmeňoch citlivých na pyretroidy (MCM-S) a rezistentných kmeňoch (PMD-R).
Charakterizácia GC-MS ukázala, že hlavnými zložkami olejov z C. rotundus, A. galanga a C. verum boli cyperén (14,04 %), β-bisabolén (18,27 %) a cinnamaldehyd (64,66 %). Tieto chemikálie preukázali rôznorodé biologické aktivity. Ahn a kol. [50] uviedli, že 6-acetoxycyperén, izolovaný z odnože C. rotundus, pôsobí ako protinádorová zlúčenina a môže indukovať apoptózu závislú od kaspázy v bunkách rakoviny vaječníkov. β-bisabolén, extrahovaný z esenciálneho oleja myrhovníka, vykazuje špecifickú cytotoxicitu proti ľudským a myším nádorovým bunkám prsníka in vitro aj in vivo [51]. Bolo hlásené, že cinnamaldehyd, získaný z prírodných extraktov alebo syntetizovaný v laboratóriu, má insekticídne, antibakteriálne, antifungálne, protizápalové, imunomodulačné, protirakovinové a antiangiogénne účinky [52].
Výsledky biologického testu aktivity dospelých jedincov závislých od dávky ukázali dobrý potenciál testovaných EO a ukázali, že kmene komárov Aedes MCM-S a PMD-R mali podobnú citlivosť na EO a PBO. Aedes aegypti. Porovnanie účinnosti EO a permetrínu ukázalo, že EO má silnejší alergický účinok: hodnoty LD50 sú 0,44 a 3,70 ng/mg u samíc pre kmene MCM-S a PMD-R. Tieto zistenia podporujú mnohé štúdie, ktoré ukazujú, že prirodzene sa vyskytujúce pesticídy, najmä produkty rastlinného pôvodu, sú vo všeobecnosti menej účinné ako syntetické látky [31, 34, 35, 53, 54]. Môže to byť preto, že prvé sú komplexnou kombináciou účinných alebo neúčinných zložiek, zatiaľ čo druhé sú purifikovanou samostatnou účinnou látkou. Rozmanitosť a komplexnosť prírodných účinných zložiek s rôznymi mechanizmami účinku však môže zvýšiť biologickú aktivitu alebo brániť rozvoju rezistencie v hostiteľských populáciách [55, 56, 57]. Mnohí výskumníci informovali o protikomárom potenciáli C. verum, A. galanga a C. rotundus a ich zložiek, ako sú β-bisabolén, cinnamaldehyd a 1,8-cineol [22, 36, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64]. Prehľad literatúry však odhalil, že neexistujú žiadne predchádzajúce správy o jeho synergickom účinku s permetrínom alebo inými syntetickými insekticídmi proti komárom rodu Aedes. Aedes aegypti.
V tejto štúdii sa pozorovali významné rozdiely v citlivosti na permetrín medzi dvoma kmeňmi Aedes. Aedes aegypti. MCM-S je citlivý na permetrín, zatiaľ čo PMD-R je naň oveľa menej citlivý s mierou rezistencie 8,41. V porovnaní s citlivosťou MCM-S je PMD-R menej citlivý na permetrín, ale citlivejší na EO, čo poskytuje základ pre ďalšie štúdie zamerané na zvýšenie účinnosti permetrínu jeho kombináciou s EO. Synergický kombinovaný biologický test na účinky na dospelých jedincov ukázal, že binárne zmesi EO a permetrínu znížili alebo zvýšili úmrtnosť dospelých jedincov Aedes. Aedes aegypti. Pridanie oleja C. verum mierne znížilo LD50 permetrínu voči MCM-S, ale mierne zvýšilo LD50 voči PMD-R s hodnotami SR 1,05 a 0,96. To naznačuje, že olej C. verum nemá synergický ani antagonistický účinok na permetrín pri testovaní na MCM-S a PMD-R. Naproti tomu oleje z C. rotundus a A. galanga preukázali významný synergický účinok tým, že výrazne znížili hodnoty LD50 permetrínu na MCM-S alebo PMD-R. Keď bol permetrín kombinovaný s EO z C. rotundus a A. galanga, hodnoty SR zmesi EO-permetrín pre MCM-S boli 6,28 a 4,00. Okrem toho, keď bol permetrín hodnotený oproti PMD-R v kombinácii s C. rotundus (SR = 8,81) alebo A. galanga (SR = 1233,33), hodnoty SR sa výrazne zvýšili. Stojí za zmienku, že C. rotundus aj A. galanga výrazne zvýšili toxicitu permetrínu proti PMD-R Ae. aegypti. Podobne sa zistilo, že PBO zvyšuje toxicitu permetrínu s hodnotami SR 1,69 a 5,69 pre kmene MCM-S a PMD-R. Keďže C. rotundus a A. galanga mali najvyššie hodnoty SR, boli považované za najlepšie synergisty pri zvyšovaní toxicity permetrínu na MCM-S a PMD-R.
Niekoľko predchádzajúcich štúdií zaznamenalo synergický účinok kombinácií syntetických insekticídov a rastlinných extraktov proti rôznym druhom komárov. Larvicídny biologický test proti Anopheles Stephensi, ktorý skúmali Kalayanasundaram a Das [65], ukázal, že fentión, širokospektrálny organofosfát, bol asociovaný s Cleodendron inerme, Pedalium murax a Parthenium hysterophorus. Medzi extraktmi sa pozorovala významná synergia so synergickým účinkom (SF) 1,31, 1,38, 1,40, 1,48, 1,61 a 2,23. Pri larvicídnom skríningu 15 druhov mangrovových rastlín sa zistilo, že petroléterový extrakt z koreňov mangrovových rastlín je najúčinnejší proti Culex quinquefasciatus s hodnotou LC50 25,7 mg/l [66]. Synergický účinok tohto extraktu a botanického insekticídu pyretra bol tiež hlásený pri znížení LC50 pyretra proti larvám C. quinquefasciatus z 0,132 mg/l na 0,107 mg/l, okrem toho bol v tejto štúdii použitý výpočet SF 1,23. 34,35,44]. Bola hodnotená kombinovaná účinnosť extraktu z koreňa ľuľka citrónového a niekoľkých syntetických insekticídov (napr. fentión, cypermetrín (syntetický pyretroid) a timethfos (organofosforový larvicíd)) proti komárom Anopheles. Stephensi [54] a C. quinquefasciatus [34]. Kombinované použitie cypermetrínu a petroléterového extraktu zo žltých plodov preukázalo synergický účinok na cypermetrín vo všetkých pomeroch. Najúčinnejší pomer bol binárna kombinácia 1:1 s hodnotami LC50 a SF 0,0054 ppm a 6,83 v porovnaní s An. Stephen West[54]. Zatiaľ čo binárna zmes S. xanthocarpum a temefosu v pomere 1:1 bola antagonistická (SF = 0,6406), kombinácia S. xanthocarpum-fentión (1:1) vykazovala synergickú aktivitu proti C. quinquefasciatus s SF 1,3125 [34]]. Tong a Blomquist [35] skúmali účinky rastlinného etylénoxidu na toxicitu karbarylu (širokospektrálny karbamát) a permetrínu pre komáre Aedes. Aedes aegypti. Výsledky ukázali, že etylénoxid z agaru, čierneho korenia, borievky, slamienky, santalového dreva a sezamu zvýšil toxicitu karbarylu pre komáre Aedes. Hodnoty SR lariev Aegypti sa pohybujú od 1,0 do 7,0. Naproti tomu žiadny z EO nebol toxický pre dospelé komáre Aedes. V tomto štádiu neboli hlásené žiadne synergické účinky kombinácie Aedes aegypti a EO-karbarylu. PBO sa použil ako pozitívna kontrola na zvýšenie toxicity karbarylu proti komárom Aedes. Hodnoty SR lariev a dospelých jedincov Aedes aegypti sú 4,9 – 9,5 a 2,3. Na larvicídnu aktivitu boli testované iba binárne zmesi permetrínu a EO alebo PBO. Zmes EO-permetrínu mala antagonistický účinok, zatiaľ čo zmes PBO-permetrínu mala synergický účinok proti komárom Aedes. Larvy Aedes aegypti. Experimenty s dávkovou odozvou a hodnotenie SR pre zmesi PBO-permetrínu však zatiaľ neboli vykonané. Hoci sa dosiahlo len málo výsledkov týkajúcich sa synergických účinkov fytosyntetických kombinácií proti prenášačom komárov, tieto údaje podporujú existujúce výsledky, ktoré otvárajú možnosť pridania synergických látok nielen na zníženie aplikovanej dávky, ale aj na zvýšenie účinku ničenia. Účinnosť hmyzu. Výsledky tejto štúdie navyše po prvýkrát preukázali, že oleje z C. rotundus a A. galanga synergicky vykazujú výrazne vyššiu účinnosť proti kmeňom komárov Aedes citlivým a rezistentným na pyretroidy v porovnaní s PBO v kombinácii s toxicitou permetrínu. Aedes aegypti. Neočakávané výsledky synergickej analýzy však ukázali, že olej z C. verum mal najväčšiu antidospelú aktivitu proti obom kmeňom Aedes. Prekvapivo bol toxický účinok permetrínu na Aedes aegypti neuspokojivý. Rozdiely v toxických účinkoch a synergických účinkoch môžu byť čiastočne spôsobené vystavením rôznym typom a hladinám bioaktívnych zložiek v týchto olejoch.
Napriek snahám o pochopenie spôsobov zlepšenia účinnosti zostávajú synergické mechanizmy nejasné. Medzi možné dôvody rozdielnej účinnosti a synergického potenciálu môžu patriť rozdiely v chemickom zložení testovaných produktov a rozdiely v náchylnosti na komáre spojené so stavom a vývojom rezistencie. V tejto štúdii existujú rozdiely medzi hlavnými a vedľajšími zložkami etylénoxidu testovanými na komáre a niektoré z týchto zlúčenín preukázateľne majú repelentné a toxické účinky proti rôznym škodcom a prenášačom chorôb [61, 62, 64, 67, 68]. Hlavné zlúčeniny charakterizované v olejoch z C. rotundus, A. galanga a C. verum, ako napríklad cypern, β-bisabolén a cinnamaldehyd, však neboli v tejto práci testované na ich anti-dospelé a synergické účinky proti Ae, v uvedenom poradí. Aedes aegypti. Preto sú potrebné ďalšie štúdie na izoláciu účinných látok prítomných v každom esenciálnom oleji a objasnenie ich insekticídnej účinnosti a synergických interakcií proti tomuto prenášaču komárov. Vo všeobecnosti insekticídna aktivita závisí od pôsobenia a reakcie medzi jedmi a tkanivami hmyzu, čo možno zjednodušiť a rozdeliť do troch štádií: prenikanie do kože tela hmyzu a membrán cieľových orgánov, aktivácia (= interakcia s cieľom) a detoxikácia toxických látok [57, 69]. Preto synergizmus insekticídov, ktorý vedie k zvýšenej účinnosti kombinácií toxických látok, vyžaduje aspoň jednu z týchto kategórií, ako je zvýšená penetrácia, väčšia aktivácia nahromadených zlúčenín alebo menej znížená detoxikácia účinnej látky pesticídu. Napríklad energetická tolerancia oneskoruje prenikanie kutikuly cez zhrubnutú kutikulu a biochemickú rezistenciu, ako je zvýšený metabolizmus insekticídov pozorovaný u niektorých rezistentných kmeňov hmyzu [70, 71]. Významná účinnosť etylénových orechov (EO) pri zvyšovaní toxicity permetrínu, najmä proti PMD-R, môže naznačovať riešenie problému rezistencie voči insekticídom interakciou s mechanizmami rezistencie [57, 69, 70, 71]. Tong a Blomquist [35] podporili výsledky tejto štúdie preukázaním synergickej interakcie medzi EO a syntetickými pesticídmi. aegypti existujú dôkazy o inhibičnej aktivite proti detoxikačným enzýmom vrátane cytochróm P450 monooxygenáz a karboxylesteráz, ktoré úzko súvisia s rozvojom rezistencie voči tradičným pesticídom. PBO sa nielen považuje za metabolický inhibítor cytochróm P450 monooxygenázy, ale tiež zlepšuje penetráciu insekticídov, čo dokazuje jeho použitie ako pozitívnej kontroly v synergických štúdiách [35, 72]. Je zaujímavé, že 1,8-cineol, jedna z dôležitých zložiek nachádzajúcich sa v galangalovom oleji, je známy svojimi toxickými účinkami na druhy hmyzu [22, 63, 73] a uvádza sa, že má synergické účinky v niekoľkých oblastiach výskumu biologickej aktivity [74]. ,75,76,77]. Okrem toho má 1,8-cineol v kombinácii s rôznymi liekmi vrátane kurkumínu [78], 5-fluóruracilu [79], kyseliny mefenámovej [80] a zidovudínu [81] tiež účinok podporujúci permeáciu in vitro. Možná úloha 1,8-cineolu v synergickom insekticídnom účinku teda nie je len ako účinná látka, ale aj ako zosilňovač penetrácie. Vzhľadom na väčší synergizmus s permetrínom, najmä proti PMD-R, môžu synergické účinky galangalového oleja a trichosanthesového oleja pozorované v tejto štúdii vyplývať z interakcií s mechanizmami rezistencie, t. j. zvýšenej priepustnosti pre chlór. Pyretroidy zvyšujú aktiváciu nahromadených zlúčenín a inhibujú detoxikačné enzýmy, ako sú cytochróm P450 monooxygenázy a karboxylesterázy. Tieto aspekty si však vyžadujú ďalšie štúdium, aby sa objasnila špecifická úloha EO a jeho izolovaných zlúčenín (samostatne alebo v kombinácii) v synergických mechanizmoch.
V roku 1977 boli v Thajsku hlásené rastúce úrovne rezistencie voči permetrínu u hlavných populácií vektorov a v nasledujúcich desaťročiach bolo používanie permetrínu do značnej miery nahradené inými pyretroidnými chemikáliami, najmä tými, ktoré boli nahradené deltametrínom [82]. Rezistencia vektorov voči deltametrínu a iným triedam insekticídov je však v celej krajine mimoriadne bežná v dôsledku nadmerného a pretrvávajúceho používania [14, 17, 83, 84, 85, 86]. Na boj proti tomuto problému sa odporúča striedať alebo opätovne používať vyradené pesticídy, ktoré boli predtým účinné a menej toxické pre cicavce, ako je permetrín. V súčasnosti, hoci sa používanie permetrínu v nedávnych národných vládnych programoch na kontrolu komárov znížilo, rezistencia voči permetrínu sa v populáciách komárov stále vyskytuje. Môže to byť spôsobené vystavením komárov komerčným domácim produktom na kontrolu škodcov, ktoré pozostávajú prevažne z permetrínu a iných pyretroidov [14, 17]. Úspešné opätovné použitie permetrínu si preto vyžaduje vývoj a implementáciu stratégií na zníženie rezistencie vektorov. Hoci žiadny z esenciálnych olejov testovaných jednotlivo v tejto štúdii nebol taký účinný ako permetrín, ich spoločné pôsobenie s permetrínom viedlo k pôsobivým synergickým účinkom. To je sľubný náznak toho, že interakcia EO s mechanizmami rezistencie vedie k tomu, že kombinácia permetrínu s EO je účinnejšia ako insekticíd alebo EO samostatne, najmä proti PMD-R Ae. Aedes aegypti. Výhody synergických zmesí pri zvyšovaní účinnosti, napriek použitiu nižších dávok na kontrolu vektorov, môžu viesť k zlepšeniu manažmentu rezistencie a zníženiu nákladov [33, 87]. Z týchto výsledkov je potešujúce konštatovať, že EO z A. galanga a C. rotundus boli výrazne účinnejšie ako PBO pri synergizácii toxicity permetrínu v kmeňoch MCM-S aj PMD-R a sú potenciálnou alternatívou k tradičným ergogénnym pomôckam.
Vybrané etylénoxidy (EO) mali významné synergické účinky pri zvyšovaní toxicity dospelých jedincov proti PMD-R Ae. aegypti, najmä galangalový olej má hodnotu SR až 1233,33, čo naznačuje, že EO má široký potenciál ako synergista pri zvyšovaní účinnosti permetrínu. To môže stimulovať použitie nového aktívneho prírodného produktu, ktorý by spolu mohol zvýšiť používanie vysoko účinných produktov na kontrolu komárov. Odhaľuje to tiež potenciál etylénoxidu ako alternatívneho synergista na účinné zlepšenie starších alebo tradičných insekticídov s cieľom riešiť existujúce problémy s rezistenciou v populáciách komárov. Používanie ľahko dostupných rastlín v programoch na kontrolu komárov nielen znižuje závislosť od dovážaných a drahých materiálov, ale tiež stimuluje miestne úsilie o posilnenie systémov verejného zdravia.
Tieto výsledky jasne ukazujú významný synergický efekt, ktorý vytvára kombinácia etylénoxidu a permetrínu. Výsledky zdôrazňujú potenciál etylénoxidu ako rastlinného synergistu v kontrole komárov, čím sa zvyšuje účinnosť permetrínu proti komárom, najmä v rezistentných populáciách. Budúci vývoj a výskum si bude vyžadovať synergickú bioanalýzu olejov z galangalu a alpínie a ich izolovaných zlúčenín, kombinácie insekticídov prírodného alebo syntetického pôvodu proti viacerým druhom a štádiám komárov a testovanie toxicity proti necieľovým organizmom. Praktické využitie etylénoxidu ako životaschopného alternatívneho synergistu.
Svetová zdravotnícka organizácia. Globálna stratégia prevencie a kontroly horúčky dengue 2012 – 2020. Ženeva: Svetová zdravotnícka organizácia, 2012.
Weaver SC, Costa F., Garcia-Blanco MA, Ko AI, Ribeiro GS, Saade G. a kol. Vírus Zika: história, vznik, biológia a vyhliadky na kontrolu. Antivírusový výskum. 2016;130:69–80.
Svetová zdravotnícka organizácia. Informačný list o horúčke dengue. 2016. http://www.searo.who.int/entity/vector_borne_tropical_diseases/data/data_factsheet/en/. Dátum prístupu: 20. januára 2017
Ministerstvo verejného zdravotníctva. Aktuálny stav prípadov horúčky dengue a hemoragickej horúčky dengue v Thajsku. 2016. http://www.m-society.go.th/article_attach/13996/17856.pdf. Dátum prístupu: 6. januára 2017
Ooi EE, Goh CT, Gabler DJ. 35 rokov prevencie horúčky dengue a kontroly vektorov v Singapure. Náhle infekčné ochorenie. 2006;12:887–93.
Morrison AC, Zielinski-Gutierrez E, Scott TW, Rosenberg R. Identifikujte výzvy a navrhnite riešenia na kontrolu vírusových vektorov Aedes aegypti. PLOS Medicine. 2008;5:362–6.
Centrá pre kontrolu a prevenciu chorôb. Horúčka dengue, entomológia a ekológia. 2016. http://www.cdc.gov/dengue/entomologyecology/. Dátum prístupu: 6. januára 2017
Ohimain EI, Angaye TKN, Bassey SE Porovnanie larvicídnej aktivity listov, kôry, stoniek a koreňov Jatropa curcas (Euphorbiaceae) proti prenášaču malárie Anopheles gambiae. SZhBR. 2014;3:29-32.
Soleimani-Ahmadi M, Watandoust H, Zareh M. Charakteristiky biotopov lariev Anopheles v oblastiach s maláriou v rámci programu eradikácie malárie v juhovýchodnom Iráne. Ázia a Tichomorie J Trop Biomed. 2014;4(Dodatok 1):S73–80.
Bellini R, Zeller H, Van Bortel W. Prehľad prístupov ku kontrole vektorov, prevencii a kontrole ohnísk vírusu západného Nílu a výzvy, ktorým čelí Európa. Parazity - vektor. 2014;7:323.
Muthusamy R., Shivakumar MS Selekcia a molekulárne mechanizmy rezistencie na cypermetrín u červených húseníc (Amsacta albistriga Walker). Biochemická fyziológia škodcov. 2014;117:54–61.
Ramkumar G., Shivakumar MS Laboratórna štúdia rezistencie na permetrín a skríženej rezistencie Culex quinquefasciatus voči iným insekticídom. Palastor Research Center. 2015;114:2553–60.
Matsunaka S, Hutson DH, Murphy SD. Chémia pesticídov: Ľudský blahobyt a životné prostredie, zv. 3: Mechanizmus účinku, metabolizmus a toxikológia. New York: Pergamon Press, 1983.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Souvonkert V, Kongmi M, Korbel AV, Ngoen-Klan R. Prehľad rezistencie voči insekticídom a behaviorálneho vyhýbania sa prenášačom ľudských chorôb v Thajsku. Parazity - prenášače. 2013;6:280.
Chareonviriyaphap T, Aum-Aung B, Ratanatham S. Súčasné vzorce rezistencie na insekticídy u prenášačov komárov v Thajsku. Southeast Asia J Trop Med Public Health. 1999;30:184-94.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Ratanatham S. Stav malárie v Thajsku. Southeast Asia J Trop Med Public Health. 2000;31:225–37.
Plernsub S, Saingamsuk J, Yanola J, Lumjuan N, Thippavankosol P, Walton S, Somboon P. Časová frekvencia mutácií F1534C a V1016G spôsobujúcich rezistenciu voči knockdownu u komárov Aedes aegypti v Chiang Mai v Thajsku a vplyv mutácií na účinnosť termálnych hmlových sprejov obsahujúcich pyretroidy. Aktatrop. 2016;162:125–32.
Vontas J, Kioulos E, Pavlidi N, Moru E, Della Torre A, Ranson H. Odolnosť voči insekticídom v hlavných vektoroch horúčky dengue Aedes albopictus a Aedes aegypti. Biochemická fyziológia škodcov. 2012;104:126–31.
Čas uverejnenia: 8. júla 2024