BielkovinyLA sú konzervované hlavnéregulátory rastuktoré hrajú ústrednú úlohu v riadení vývoja rastlín v reakcii na vnútorné a environmentálne podnety. ... je posttranslačne regulovaná dvoma mechanizmami: polyubikvitináciou indukovanou fytohormónom giberelínom, ktorá vedie k jeho rýchlej degradácii, a konjugáciou malých modifikátorov podobných ubikvitínu (SUMO) na zvýšenie jeho akumulácie. Okrem toho je aktivita je dynamicky regulovaná dvoma rôznymi glykozyláciami: interakcia je zosilnená O-fukozyláciou, ale inhibovaná modifikáciou O-viazaného N-acetylglukozamínu (O-GlcNAc). Úloha fosforylácie V predchádzajúcich štúdiách však zostáva nejasná, pretože výsledky siahajú od tých, ktoré ukazujú, že fosforylácia podporuje alebo znižuje degradáciu až po tie, ktoré ukazujú, že fosforylácia neovplyvňuje jej stabilitu. V tejto štúdii identifikujeme fosforylačné miesta vga1-3(RGA, AtDELLA) purifikované z Arabidopsis thaliana pomocou hmotnostnej spektrometrie a ukazujú, že fosforylácia dvoch RGA peptidov v oblastiach PolyS a PolyS/T podporuje väzbu H2A a zvyšuje aktivitu RGA. Asociácia RGA s cieľovými promótormi. Fosforylácia neovplyvňuje interakcie RGA-TF ani stabilitu RGA. Naša štúdia odhaľuje molekulárny mechanizmus, ktorým fosforylácia indukuje aktivitu DELLA.
Na objasnenie úlohy fosforylácie v regulácii funkcie Aleksandrieho enzýmu (PE) je nevyhnutné identifikovať miesta fosforylácie Aleksandrieho enzýmu in vivo a vykonať funkčné analýzy v rastlinách. Afinitnou purifikáciou rastlinných extraktov a následnou MS/MS analýzou sme identifikovali niekoľko fosfozitov v RGA. V podmienkach deficitu GA sa fosforylácia RHA zvyšuje, ale fosforylácia neovplyvňuje jej stabilitu. Dôležité je, že testy co-IP a ChIP-qPCR ukázali, že fosforylácia v oblasti PolyS/T RGA podporuje jeho interakciu s H2A a jeho asociáciu s cieľovými promótormi, čo odhaľuje mechanizmus, ktorým fosforylácia indukuje funkciu RGA.
RGA sa na cieľový chromatín naväzuje interakciou subdomény LHR1 s TF a potom sa viaže na H2A prostredníctvom svojej oblasti PolyS/T a subdomény PFYRE, čím vytvára komplex H2A-RGA-TF na stabilizáciu RGA. Fosforylácia Pep 2 v oblasti PolyS/T medzi doménou a doménou GRAS neidentifikovanou kinázou zvyšuje väzbu RGA-H2A. Mutantný proteín rgam2A ruší fosforyláciu RGA a prijíma inú konformáciu proteínu, aby interferoval s väzbou H2A. To vedie k destabilizácii prechodných interakcií TF-rgam2A a disociácii rgam2A od cieľového chromatínu. Tento obrázok znázorňuje iba transkripčnú represiu sprostredkovanú RGA. Podobný vzorec by sa dal opísať aj pre transkripčnú aktiváciu sprostredkovanú RGA, s výnimkou, že komplex H2A-RGA-TF by podporoval transkripciu cieľového génu a defosforylácia rgam2A by znižovala transkripciu. Obrázok upravený podľa Huang et al.21.
Všetky kvantitatívne údaje boli štatisticky analyzované pomocou programu Excel a významné rozdiely boli stanovené pomocou Studentovho t-testu. Na predbežné určenie veľkosti vzorky neboli použité žiadne štatistické metódy. Z analýzy neboli vylúčené žiadne údaje; experiment nebol randomizovaný; výskumníci neboli slepí voči rozloženiu údajov počas experimentu a vyhodnoteniu výsledkov. Veľkosť vzorky je uvedená v legende k obrázku a v súbore so zdrojovými údajmi.
Viac informácií o dizajne štúdie nájdete v abstrakte správy o prirodzenom portfóliu, ktorý je súčasťou tohto článku.
Proteomické údaje získané pomocou hmotnostnej spektrometrie boli poskytnuté konzorciu ProteomeXchange prostredníctvom partnerského repozitára PRIDE66 s identifikátorom súboru údajov PXD046004. Všetky ostatné údaje získané počas tejto štúdie sú uvedené v doplnkových informáciách, doplnkových dátových súboroch a súboroch s nespracovanými údajmi. Zdrojové údaje sú uvedené pre tento článok.
Čas uverejnenia: 8. novembra 2024