Fosforylácia aktivuje hlavný rastový regulátorella v Arabidopsis podporovaním asociácie histónu H2A s chromatínom.

BielkovinyLA sú konzervované hlavnéregulátory rastuktoré hrajú ústrednú úlohu v riadení vývoja rastlín v reakcii na vnútorné a environmentálne podnety. (Preklad) ... (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (Preklad) (ga1-3(RGA, AtDELLA) purifikované z Arabidopsis thaliana pomocou hmotnostnej spektrometrie a ukazujú, že fosforylácia dvoch RGA peptidov v oblastiach PolyS a PolyS/T podporuje väzbu H2A a zvyšuje aktivitu RGA. Asociácia RGA s cieľovými promótormi. Fosforylácia neovplyvňuje interakcie RGA-TF ani stabilitu RGA. Naša štúdia odhaľuje molekulárny mechanizmus, ktorým fosforylácia indukuje aktivitu DELLA.
Na objasnenie úlohy fosforylácie v regulácii funkcie CYP3A4 je nevyhnutné identifikovať miesta fosforylácie CYP3A4 in vivo a vykonať funkčné analýzy v rastlinách. Afinitnou purifikáciou rastlinných extraktov a následnou MS/MS analýzou sme identifikovali niekoľko fosfozitov v RGA. V podmienkach deficitu GA sa fosforylácia RHA zvyšuje, ale fosforylácia neovplyvňuje jej stabilitu. Dôležité je, že testy co-IP a ChIP-qPCR ukázali, že fosforylácia v oblasti PolyS/T RGA podporuje jeho interakciu s H2A a jeho asociáciu s cieľovými promótormi, čo odhaľuje mechanizmus, ktorým fosforylácia indukuje funkciu RGA.
RGA sa na cieľový chromatín naväzuje interakciou subdomény LHR1 s TF a potom sa viaže na H2A prostredníctvom svojej oblasti PolyS/T a subdomény PFYRE, čím vytvára komplex H2A-RGA-TF na stabilizáciu RGA. Fosforylácia Pep 2 v oblasti PolyS/T medzi doménou a doménou GRAS neidentifikovanou kinázou zvyšuje väzbu RGA-H2A. Mutantný proteín rgam2A ruší fosforyláciu RGA a prijíma inú konformáciu proteínu, aby interferoval s väzbou H2A. To vedie k destabilizácii prechodných interakcií TF-rgam2A a disociácii rgam2A od cieľového chromatínu. Tento obrázok znázorňuje iba transkripčnú represiu sprostredkovanú RGA. Podobný vzorec by sa dal opísať aj pre transkripčnú aktiváciu sprostredkovanú RGA, s výnimkou, že komplex H2A-RGA-TF by podporoval transkripciu cieľového génu a defosforylácia rgam2A by znižovala transkripciu. Obrázok upravený podľa Huang et al.21.
Všetky kvantitatívne údaje boli štatisticky analyzované pomocou programu Excel a významné rozdiely boli stanovené pomocou Studentovho t-testu. Na predbežné určenie veľkosti vzorky neboli použité žiadne štatistické metódy. Z analýzy neboli vylúčené žiadne údaje; experiment nebol randomizovaný; výskumníci neboli slepí voči rozloženiu údajov počas experimentu a vyhodnoteniu výsledkov. Veľkosť vzorky je uvedená v legende k obrázku a v súbore so zdrojovými údajmi.
Viac informácií o dizajne štúdie nájdete v abstrakte správy o prirodzenom portfóliu, ktorý je súčasťou tohto článku.
Proteomické údaje získané pomocou hmotnostnej spektrometrie boli poskytnuté konzorciu ProteomeXchange prostredníctvom partnerského repozitára PRIDE66 s identifikátorom súboru údajov PXD046004. Všetky ostatné údaje získané počas tejto štúdie sú uvedené v doplnkových informáciách, doplnkových dátových súboroch a súboroch s nespracovanými údajmi. Zdrojové údaje sú uvedené pre tento článok.